Spanischlehrer Will Schuester (Matthew Morrison) übernimmt an der fiktiven William McKinley High School in Lima, Ohio die Leitung des "Glee Club", eines Show-Chors, dem er als Schüler einst selbst angehört hat. Doch das ist lange her und vom alten Glanz des Chors nicht mehr viel übrig, was Will unbedingt ändern möchte. Die Startbedingungen sind nicht die besten, denn sein kleines Team entpuppt sich als bunt gemischte Gruppe von Außenseitern: Rachel (Lea Michele), die sich schon am Broadway sieht, Diva Mercedes (Amber Riley), der an den Rollstuhl gefesselte Artie (Kevin McHale), die schüchterne Stotterin Tina (Jenna Ushkowitz) und der insgeheim schwule Kurt (Chris Colfer) - keine leichte Aufgabe, aus ihnen eine schlagkräftige Gesangstruppe zu formen. Während die Vorbereitungen für den anstehenden Musikwettbewerb schon auf Hochtouren laufen, schafft es Will aber, auch einige der beliebteren Kinder für den "Glee Club" zu gewinnen, etwa Quarterback Finn (Cory Monteith), seinen rüpelhaften Mannschaftskollegen Puck (Mark Salling) und drei Cheerleader. Er ahnt nicht, dass Letztere Spitzel sind, die ihn für seine skrupellose Rivalin, die international gefeierte Cheerleader-Trainerin Sue Sylvester (vielfach ausgezeichnet: Jane Lynch), ausspionieren sollen. Bei Glee geben sich die Stars die Klinke in die Hand: Musikalische Gastauftritte haben unter anderem Britney Spears, Gwyneth Paltrow, Neil Patrick Harris und Whoopi Goldberg.