Die "Division", eine ehemals von der US-Regierung finanzierte Geheimorganisation, rekrutiert junge Leute mit kriminellem Hintergrund, um alle Hinweise auf ihr vergangenes Leben zu löschen und sie zu tödlichen Spionen und Meuchelmördern zu formen. Inzwischen dienen die Operationen der Division nur noch den eigenen Zwecken. Auch die abtrünnige Agentin Nikita Mears (Maggie Q) war für sie im Einsatz, bis man ihren zivilen Verlobten umbringen ließ. Anschließend wendete sie sich gegen ihren Auftraggeber und tauchte drei Jahre lang unter, doch jetzt ist die Zeit gekommen, um zum Gegenschlag auszuholen. Dazu trainiert Nikita ihre junge Verbündete Alex Udinov (Lyndsy Fonseca), die selbst entschlossen ist, die Division zu Fall zu bringen, und schleust sie als Maulwurf ein. Die Serie basiert auf dem gleichnamigen französischen Film von Luc Besson.